Isolering af DNA fra celler er første trin i mange molekylærbiologiske undersøgelser. Nedenstående fremgangsmåde er en meget generel metode, der kan anvendes på mange celletyper, der indeholder en vis mængde DNA. Princippet i metoden er, at man først mekanisk nedbryder vævet, derefter nedbryder man eventuelle cellevægge, cellemembraner og kernemembraner med et vaskemiddel (et detergent). Cellefragmenter adskilles ved filtration. DNA og opløselige proteiner forbliver i den frafiltrerede væske. Med et enzym fjerner man proteinerne, og endelig udfældes DNA i iskold ethanol.
Materialer Til at fremstille løg ekstrakt: Skarp grøntsagskniv og spækbræt 100 g løg (brug et stort løg, oftest polyploide 3 g NaCl (bordsalt) 100 ml destilleret vand 10 ml Engangssprøjte 10 ml opvaskemiddel (af den billige ikke- koncentrerede slags) Vandbad, 60 °C Reagensglasstativer Termometer Isbad Blender Kaffefilter 2 stk 250 ml bægerglas 1 stk 100 ml måleglas
Til at adskille DNA fra løg ekstraktet: Stort reagensglas 6 ml løgvævs ekstrakt Protease, Neutrase® fra Novozymes Glasspatel eller lignende glas stav, gerne træpind 9 ml iskold 96% ethanol. ( Det er vigtigt at anvende 96% alkohol. Placer alkoholen i fryseren et døgn før forsøget. Alkoholen skal først tages ud lige før den skal bruges) Alternativt kan bruges husholdningssprit (93 %) eller propan- 2- ol (isopropyl alhohol), ligeledes iskold fra fryser.
Det er gratis at oprette en konto