DNA sekventering: metode og fremgangsmåde

DNA sekventering

Indholdsfortegnelse

Formål3

Teori3

Trin 14

Trin 2 og 36

Fremgangsmåde6

Trin 16

Trin 26

Trin 36

Trin 46

Trin 57

Trin 67

Resultater7

Resultatbehandling8

Diskussion9

Konklusion9

Samlet vurdering9

Formål

At lære metoden til at kunne finde rækkefølgen af et DNA

Teori

DNA-strengen har en kodende streng, som er den der går fra 5´ til 3´, udover det har den også en ikke kodende streng, som går fra 3´til 5´. Den kaldes også for template eller en skabelonstreng. Den kodende streng har startkoden TAC

5´__ __ __ __ __ __3´ - Kodende streng

3´__l__l__l__l__l__5´ - Ikke kodende streng

Der er tre trin. I første sker kopieringen af skabelonstrengen, 2. trin sorteres DNA-strengene og sidste og 3. trin aflæses resultaterne.

Normalt nukleotid (dNTP)Nukleotider til sekventering (ddNTP)

Trin 1

DNA har som bekendt to strenge, som løber i hver sin retning (3´til 5´og 5´til 3´) derfor vil DNA-polymerase også kopiere de to strenge i hver sin retning. Det kræver at der skal være to forskellige primere, én til start af kopiering i hver retning. DNA-polymerase bygger nemlig en ny streng op fra retningen 5´til 3´. Den streng som enzymet bruger til skabelonen, skal så gå modsat, nemlig 3´til 5´.

Polymerase-kædereaktion er en metode, som bruges til at omformere dele af DNA-sekvenser. Gennem gentagende runder replikation, altså processen hvor kromosomernes DNA kopirer sig selv forud for celledeling, kan man bestemme hvordan skal foregå. Ved hjælp af specifikke primere dannes der store mængder af gener.