Isolering af DNA fra løg

Teori: Isolering af DNA fra celler er første trin i mange molekylærbiologiske undersøgelser. Denne fremgangsmåde er en meget generel metode, der kan anvendes på mange celletyper, der indeholder en vis mængde DNA. Princippet i metoden er, at man først ødelægger cellemembraner og kernemembraner med et vaskemiddel for at få DNA ud af kernen og cellen. Derefter opvarmer man DNA for at ødelægge enzymer, der findes i cellen, og som kan nedbryde DNA (DNAaser). Herefter ødelægger man plantevævet, fx cellulose, mekanisk ved at blende det og dermed skære det i stykker. Celledelene adskilles ved at filtrere opløsningen. DNA og opløselige proteiner bliver i den frafiltrerede væske. Med et enzym fjerner man proteinerne (histoner) som DNA er rullet op omkring, og endelig tilsætter man isafkølet alkohol, som gør at DNA bliver synlig i væsken.

Materialer:

Til at fremstille ekstrakt:

Blender

Skarp kniv og skærebræt

Vandbad, 60°C (fælles)

Isbad (fælles)

1 stk. 250 ml bægerglas pr. gruppe

Kaffefilter

1 stort løg ca. 100 gram

1 spiseskefuld opvaskemiddel

1 teskefuld salt

100 ml demineraliseret vand

Til at adskille DNA fra ekstraktet:

Glasspaltel

Stort reagensglas

6 ml løgvævs ekstrakt

Protease-enzym, NOVO Neutrase (fælles – udleveres af lærerne)

9 ml iskold 96% alkohol (hentes i fryseren lige inden brug – udleveres af lærerne)