Isolering af DNA fra løg

Formålet med dette forsøg er at isolere DNA fra løgceller.

Teori:

DNA står for deoxyribonukleinacid, som er et molekyle, bestående af to lange kæder, der snor sig om hinanden. Hos eukaryote celler ligger DNA-tråde, kaldet kromosomer, i cellekernen og er omgivet af kernemembranen. Hos prokaryote celler er DNA ringformet og flyder frit i cytoplasmaet. Løgceller, som alle andre planteceller, hører under de eukaryote celler, dvs. at kromosomerne er omringet af en kernemembran. Udover celle- og kernemembran, har planteceller har også cellevæg, og det skal man tage højde for, når man vil isolere DNA.

Princippet i metoden er, at man først mekanisk nedbryder vævet for at adskille cellerne fra hinanden. Derefter nedbryder man cellevægge, cellemembraner og kernemembraner med et vaskemiddel, som også kaldes et detergent. De andre cellefragmenter adskilles ved filtration, mens DNA og opløselige proteiner forbliver i den frafiltrerede væske. Med enzymet protease fjerner man proteinerne, og endelig udfældes DNA i iskold ethanol.

Materiale:

Til fremstilling af løg ekstrakt:

Blender

Skarp grønsagskniv og spækbræt

Vandbad, 60 °C

Isbad

Termometer

2 stk. 250 ml bægerglas

Kaffefilter

100 g løg (brug et stort løg, oftest polyploider)

10 ml vaskemiddel (af den billige ikke-koncentrerede slags)

3 g NaCl

100 ml destilleret vand

Mikroskop