Isolering af DNA fra kiwi

Formål: Formålet med forsøget er, at få større indblik i DNA og celle-

Opbygning, og se hvordan det er muligt at isolere DNA fra kiwi.

Materialer:

Blender

Grønsagskniv og skærebræt

Vandbad (60° C)

Is bad

Thermometer

2 stk. 250 ml. bægerglas

Lille tragt + filter

½ kiwi frugt

10 ml opvaskemiddel

3 g NaCl (bordsalt)

100 ml destilleret vand

1 eppendorfrør

Glasspatel

Reagensglas

6 ml 96 % ethanol

Fremgangsmåde:

Fremstilling af kiwiekstraktet:

Først skæres ½ kiwi ud i små stykker og hældes i et bægerglas.

Opvaskemiddel, vand og salt blandes i et andet bægerglas. Blandingen nedbryder cellemembranerne i kiwien. Vaskemidlet danner komplekser med membranernes fedtstoffer og proteiner. Kiwi indeholder protease, som fælder opløselige proteiner.

Ca. 50 ml af vaskemiddel/saltopløsnings-blanding hældes over kiwien og blandes grundigt.

Derefter stilles bægerglasset i et 60° C varmt vandbad i 10 minutter. Ved 60° C vil DNA-serne blive ødelagt så man kun har det rene DNA. Hvis glasset er længere tid i vandbadet, bliver DNA begynde at blive nedbrudt.

Når de 10 minutter er gået, sættes glasset over i et isbad i 5 minutter. Grunden til nedkølingen er, at man skal stabilisere det DNA der er tilbage.

Derefter hældes blandingen i blenderen. Der blendes i præcis 5 sekunder ved højeste hastighed. Blendning nedbryder cellevægge og membraner, så DNA bliver frigjort. Hvis man blender længere tid, vil DNA molekylerne blive ødelagt.