Blodtypegenotypen: Bestemmelse på DNA-niveau

Formål: At bestemme genotypen indenfor AB0-blodtypen direkte på DNA-niveau.

Teori: Se øvelses vejledning.

Materialer:

Isolering af DNA: se øvelses vejledning

PCR: se øvelses vejledning

Klipning med restriktionsenzymer: Se øvelses vejledning

Gelelektroforese: Se øvelses vejledning

Fremgangsmåde:

Isolering af DNA:

Først tager man en tændstik og skraber forsigtigt på indersiden af kinden, derefter putter du tændstikken ned i et eppendorfrør med lysisbuffer og rører rundt så alle celler bliver tilbage i eppendorfrøret. Så tager du en ny tændstik og gør det samme i den anden kind. Så vendes eppendorfrørene 5 gange.

Så rengøre du din fingerspids med alkohol og bagefter prikker du hul med en lancet og presser en dråbe blod ned i et nyt eppendorfrøret med lysisbuffer. Dette lukkes også og vendes 5 gange.

Så tilsætter vi 2 L proteinase K-opløsning. Proteinase K er et enzym, der bl.a. nedbryder de kerneproteiner som binder DNA, og cytoplasmatiske enzymer som nedbryder DNA.

Vi mærker eppendorfrørene med K for kind og B for blod inden de sættes ned i et vandbad på 55C i 15 min., for at kunne nedbryde protein DNAserinzymer der vil nedbryde DNA.

Så tog vi eppendorfrørene op og tilsatte 120 L 5 M saltopløsning. Na ionerne binder til DNA’ets fosfatgrupper, hvorved den negative ladning neutraliseres. Når NaCl tilsættes, frastøder DNA-molekylerne ikke længere hinanden, og DNA’et har derved lettere ved at fælde ud når der tilsættes ethanol.