Et gen er et stykke DNA er det vi har i os som gør vores egenskaber. DNA indeholder informationer om, hvordan et protein opbygges. Proteinet giver en organisme en særlig egenskab. Genetisk transformation betyder at en ændring forårsaget af gener, og involverer indsættelsen af et gen i en organisme for at ændre dens egenskaber.
Vi skal i denne øvelse transformere flere bakterier med et gen, som hedder Grønt Fluorescerende Protein (GFP). GFP får goplen til at fluorescere, som så få det lyse i mørket. Ved transformationen kan bakterierne under UV-lyst komme til at skinne en grøn farve.
Materialer:
1 LB-plade med bakteriekolonier
Agarplader (1 LB, 2LB/amp og 1 LB/amp/ara)
LB-medium
Farvede mikrocentrifugerør
1 pakke sterile podenåle
5 pipetter
1 flamingoflyder
1 bakke med is (isterninger)
Tusch til mærkning
Tape
pGLO-plasmid
Varmeskab 37 grader
Vandbad 42 grader
Fremgangmåde:
Først skulle vi mærker de forskellige centrifugerør, med + og - DNA, og herefter sætte dem i flamingoholderen. Så overførte vi 250 mikroliter transformationsopløsning (CaCl2) i begge rør, efter det placerede vi flamingoholderen med rørene i vand med isterninger. Hermed skulle vi ved bruge en steril podenål for at overfører en bakteriekoloni til hvert af rørene. Hermed skulle vi tage pGLO-opløsning, og lyse på det med en UV-lampe hvor vi kunne se at der ikke skete det store. Herefter skulle vi igen tage en ny steril podenål, og overfører en loop-fuld plasmidopløsning til røret mærket med “+” (+DNA), og blande det rundt. Så skulle rørene stå på is i 10 minutter, og mens de var det, skulle agarpladerne klargøres, ved at mærker dem:
Det er gratis at oprette en konto