Alkalisk fosfatase: analyse af enzymkinetik

Formålet med denne analyse er, at undersøge reaktionshastighedens afhængighed af substratkoncentrationens for en enzymkatalyseret reaktion. Alt i alt vil man gå ind og måle enzymaktiviteten. Undersøgelsen udføres vha. VITROS ALKP slides & VITROS Chemistry Products kalibratorkit 3 på VITROS Chemistry Systems. Undersøgelsen udføres således; Der bliver afpippeteret en dråbe patientprøve på sliden og fordeles jævnt vha. spredningslaget. Spredningslaget indeholder p-nitrophenol fosfatsubstrat og andre komponenter der anvendes til reaktionen.

Hvad hedder enzymet?

Enzymet hedder alkalisk fosfatase. Alkalisk fosfatase forekommer hovedsageligt i lever, knogler, tarme, nyrer, lunger og placenta.

Hvilken reaktion katalyseres af enzymet?

Reaktionen der katalyseres af enzymet er; p-nitrophenyl fosfatsubstrat som omdannes til p-nitrophenol ved basisk pH.

p-nitrophenyl fosfat ? p-nitrophenol + H3PO4

Hvad hedder substratet?

Substratet hedder p-nitrophenyl fosfat

Hvad hedder produktet?

Produktet ved reaktionen hedder p-nitrophenol + H3PO4

Hvilket stof kan vi måle?

Det stof vi kan gå ind og måle er; p-nitrophenol dette stof trænger ned i det underliggende lag på spredningslaget, her holdes der øje med p-nitrophenol vha. reflektionsspektrofotometri.

Hvordan måles stoffet?

Stoffet måles således, at alkalisk fosfatase som er enzymet tilsættes i reaktionen, herved går enzymet ind og katalyserer hydrolysen af p-nitrophenyl fosfat til p-nitrophenol. Herved går man ind og måler på ændringen af den kinetiske reflektionsdensitet som forvandles til enzymaktivitet.