Bestemmelse af proteinindhold i skummetmælk med Biuretmetoden

I skal bruge denne vejledning som skabelon i jeres aflevering. Dvs. I kan udfylde vejledningen og aflevere den som en opgave. Brug dog anden farve tekst til det I selv skriver og tilføjer til opgaven. Husk at der kan være ting I skal besvare i hele opgaven og I kan også selv tilføje noget hvis I synes det er relevant.

FORMÅL

Eksperimentets formål er at foretage en spektrofotometrisk bestemmelse af protein-indholdet

i skummetmælk med Biuretmetoden. Metoden beror på en kompleksdannelse mellem Cu2+ og

proteinstoffet.

TEORI

Proteiner er som bekendt opbygget af aminosyrer, der er bundet sammen med

peptidbindinger, karakteriseret ved gruppen -NHCO-. Biuretreagenset indeholder Cu2+-ioner,

som kan danne Cu2+ protein-komplekser med nitrogenatomet fra peptidgrupperne som

ligander. Komplekserne har en blåviolet farve og absorberer lys ved ca. 540 nm.

Farveintensiteten og hermed absorbansen af lyset er proportional med antallet af

peptidbindinger i opløsningen. Derfor må absorbansen også være proportional med proteinkoncentrationen.

Modeludsnit af Cu2+ protein-komplekset

(ca. 4 peptidbindinger pr. Cu2+-ion)

I eksperimentet fremstilles en standardkurve ud fra kendte protein-koncentrationer. Herved

kan ukendte protein-koncentrationer bestemmes, idet der benyttes, at Lambert-Beers lov gælder for små koncentrationer dvs.: A = ???l?[protein], hvor A er absorbansen ved den valgte bølgelængde, ?? er ekstinktionskoefficienten for fastholdt bødlgelængde, l er kuvettebredden og [protein] den aktuelle protein-koncentration af stoffet.