Formål: formålet med denne rapport er at vise/forklare, hvordan man kan adskille DNA-molekyler ved elektroforese.
Teori: Efter oprensningen af DNA-molekylerne kan man tjekke den mængde man har fået oprenset. Dette gør man ved hjælp af elektroforese. Ved en gelelektroforese kan DNA-fragmenterne adskilles efter størrelse. Dette indebærer dog at DNA-molekylerne er skåret med restriktionsenzymer. Man benytter denne metode til at adskille enten peptider/proteiner, aminosyrer eller, som i vores tilfælde, til at adskille DNA og RNA.
Princippet i gelelektroforese: Man benytter et elektroforesekar, hvortil der hører et kar, som man kan støbe gelen i. Gelen (til en portion på 40 ml.) består bl.a. af 0,7 % ararosegel der er opløst i ionbyttet vand, derudover tilsættes der en gelbuffer, som sørger for at gelen bliver neutralt laddet. Til slut tilsætter man en ethidiumbromidstamopløsning, som er et mutantstof. Dette stof udsender en orange farve når det bliver udsat for UV-lys. I blandingen er der også Aragose, dette er et sukkerstof der gør det muligt for DNAét at vandre gennem gelen
Når denne blanding er lavet kan den hældes i støbeformen, hvori der sidder en kam med 12 tænder. Kammen skal sidde i den ende af karet hvor den negative elektrode sidder, dette gøres den på grund af at DNAét er negativt laddet og vil derfor bevæge sig mod plus-polen i elektroforesekaret. Nu hældes elektroforesebufferen over, så det ligger ca. 3 mm over gelen. Der efter tages kammen op. Der fremkommer 12 huller fra kammen, disse kaldes for sloth´ene. Se fig.1.
Det er gratis at oprette en konto