(kilde: Genteknologihæftets bearbejdning af Dean Madden og John Scollar,1993:”DNA your onions?”, NCBE. Let bearbejdet i forhold til Genteknologi hæftet)
Isolering af DNA fra celler er første trin i mange molekylærbiologiske undersøgelser. Nedenstående fremgangsmåde er en meget generel metode, der kan anvendes på mange celletyper, der indeholder en vis mængde DNA.
Princippet i metoden er at man først mekanisk nedbryder vævet, derefter nedbryder man eventuelle cellevægge, cellemembraner og kernemembraner med et vaskemiddel (et detergent). Cellefragmenter adskilles ved filtration. DNA og opløselige proteiner forbliver i den frafiltrerede væske. Med et enzym fjerner man proteinerne, og endelig udfældes DNA i iskold ethanol.
Materialer
A:Til at fremstille løg / kiwi-ekstrakt:
Blender
Skarp kniv og spækbræt
Vandbad, 60°C
Isbad
Termometer
2 stk 250 ml bægerglas pr gruppe
Kaffefilter
100 g løg (brug store løg, oftest polyploide) eller 1 kiwifrugt uden skal
10 ml opvaskemiddel (ikke-koncentrerede)
3 g NaCl (bordsalt)
100 ml destilleret vand
B:Til at adskille DNA fra plante-ekstraktet:
Glasspatel
10 ml måleglas
Stort reagensglas
Stativ med klemme
6 ml løg-vævs ekstrakt
Protease-enzym, NOVO Neutrase (ikke til kiwi)
9 ml iskold 96% ethanol (alkoholen har været i fryser et døgn)
Fremgangsmåde
Fremstilling af løg-ekstraktet eller kiwi
Tilsæt 3 g NaCl til opvaskemidlet. Fyld på til 100 ml med destilleret vand
Det er gratis at oprette en konto