Isolering af DNA fra kiwi

I er blevet introduceret til opbygningen af DNA, og I skal nu udføre et forsøg, der går ud på at isolere DNA fra en kiwi.

At kunne isolere DNA fra celler er af stor relevans, da dette er udgangspunktet for en lang række biologiske undersøgelser.

Nedenstående fremgangsmåde er en meget generel metode, der kan anvendes på mange celletyper. Metoden kan opdeles i 2 delsekvenser:

Fremstilling af kiwi-ekstrakt

Adskillelse af DNA fra kiwi-ekstrakt

Princippet i metoden er, at man først mekanisk nedbryder vævet, derefter nedbryder man eventuelle cellevægge, cellemembraner og kernemembraner med opvaskemiddel. Cellefragmenter adskilles ved filtration. DNA og opløselige proteiner forbliver i den frafiltrerede væske. Frugtens egne enzymer nedbryder proteinerne, og endelig udfældes DNA i iskold ethanol.

MATERIALER:

Fremstilling af kiwi-ekstrakt:

Ca. 2 stk. kiwifrugt

Kniv

Spækbræt

Bægerglas (2 stk. – 250 ml)

Glasspatel

3 ml opvaskemiddel (koncentreret)

3 g. NaCl

100 ml ionbyttet vand

Vandbad, 60 °C

Isbad

Termometre

Blender

Tragt

Kaffefiltre

Adskillelse af DNA fra kiwi-ekstrakt:

Glasspatel

10 ml måleglas

Engangspipetter

Stort reagensglas

6 ml frugt-vævs ekstrakt

3 dråber protease

9 ml iskold 96% ethanol

FREMGANGSMÅDE:

Fremstilling af kiwi-ekstrakt:

Skær ca. 100g skrællet kiwi i små stykker på ca. 0,5 x 0,5 cm

På denne måde ødelægger vi cellevæggene i kiwien.