Enzymkinetik: Bestemmelse af Vmax og Km for alkalisk fosfatase

I denne opgave udforsker vi enzymets initialhastighed med forskellige substratkoncentrationer, ved hjælp af Michaelis-Menten kinetik for alkalisk fosfatase (AP). Ved forskellige substratkoncentrationer og v0 initialhastighed, kan vi bestemme Vmax altså enzymets maximal hastighed og Michaelis-konstant Km , hvor hastigheden er den halve af Vmax. Dette eksperiment er afgørende for vores forståelse af enzymkinetik.

Indholdsfortegnelse

Abstract2

Problemformulering4

Indledning4

Teori5

Enzym7

Forsøge mad alkalisk Fosfatase8

Spektrofotometri9

Databehandling/Diskussion10

Konklusion14

Citerede værker15

Bilag15

Indledning

Der er to størrelser i enzymkinetik, som man bekræfter sig med, nemlig Vmax og Km. Vmax er enzymets maximal hastighed, hvor enzym omdanner substrat til produkt. Trin to i figur 4 har en begrænsede hastighed, dvs. at den er proportional med mængden af enzym. Hastigheden vil stig, hvor enzym omdanner substrat til produkt, med en stigende substratkoncentration, vil det nærme sig til den maximal hastighed Vmax. Km også kaldt for Michaeliskonstanten, er den substratkoncentration, der giver den halve af Vmax dvs. vo=vmaks2 . Et enzym med lav Km -værdi kræv er en lav substratkoncentration, et enzym med høj Km -værdien kræver en høj substratkoncentration. Analysen af Km og Vmax giver en dybdegående forståelse af enzymets kinetik og dets evne til at katalysere reaktioner.

Problemformulering

Hvordan bestemme Vmax og Km gennem en undersøgelse med enzymkoncentration.